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更新時(shí)間:2024-11-07
小鼠脾臟單核細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
脾臟 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 巨噬細(xì)胞樣 | YS-01X8521 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠脾臟單核分離自脾臟組織;脾臟是機(jī)體大的免疫器官,占全身淋巴組織總量的25%,含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處,與9-11肋相對(duì),長(zhǎng)軸與第10肋一致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰,前方有胃,后方與左腎、左腎上腺毗鄰,下端與結(jié)腸脾溝相鄰,地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞器官。單核細(xì)胞(monocytes)是體積大的白細(xì)胞。其細(xì)胞核常偏位,呈多形性,如卵圓形、腎形(a)、馬蹄形(b)、不規(guī)則形(c)等,常有折疊感(c);染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀,著色較淺。胞質(zhì)較多,嗜堿性,但因含大量細(xì)小的嗜天青顆粒而染成灰藍(lán)色,顆粒含過(guò)氧化物酶。單核細(xì)胞是血液中大的血細(xì)胞。目前認(rèn)為它是巨噬細(xì)胞的前身,具有明顯的變形運(yùn)動(dòng),能吞噬、清除受傷、衰老的細(xì)胞及其碎片。單核細(xì)胞還參與免疫反應(yīng),在吞噬抗原后將所攜帶的抗原決定簇轉(zhuǎn)交給淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的特異性免性反應(yīng)。單核細(xì)胞也是對(duì)付細(xì)胞內(nèi)致病細(xì)菌和寄生蟲的主要細(xì)胞防衛(wèi)系統(tǒng),還具有識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。淋巴細(xì)胞則為具有特異性免疫功能的細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞主要參與細(xì)胞免疫反應(yīng)而B淋巴細(xì)胞參與體液免疫反應(yīng)。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脾臟單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脾臟單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài):巨噬細(xì)胞樣
傳代特性:不增殖;不傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
小鼠脾臟單核體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人周期素依賴性激酶5試劑盒 人周期素依賴性激酶5試劑盒 人周期素依賴性激酶5試劑盒,,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人周期素依賴性激酶5試劑盒、人周期素依賴性激酶5 試劑盒
人周期素依賴性激酶4試劑盒 人周期素依賴性激酶4試劑盒 人周期素依賴性激酶4試劑盒,,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人周期素依賴性激酶4試劑盒、人周期素依賴性激酶4 試劑盒
人周期素依賴性激酶2試劑盒 人周期素依賴性激酶2試劑盒 人周期素依賴性激酶2試劑盒,,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人周期素依賴性激酶2試劑盒、人周期素依賴性激酶2 試劑盒
人周期素依賴性激酶1試劑盒 人周期素依賴性激酶1試劑盒 人周期素依賴性激酶1試劑盒,,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人周期素依賴性激酶1試劑盒、人周期素依賴性激酶1 試劑盒
腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體
γ2肌動(dòng)蛋白抗體
IL23重組大鼠 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein
CR (Calretinin 0.5mgCR (Calretinin) 鈣結(jié)合蛋白(抗原)
MME重組人 CD10 / Neprilysin / MME 蛋白 Protein
IL36G Protein Human 重組人 IL36G / IL1F9 蛋白
RTN4R Protein Mouse 重組小鼠 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
CR (Calretinin 0.5mgCR (Calretinin) 鈣結(jié)合蛋白(抗原)
IL36G Protein Human 重組人 IL36G / IL1F9 蛋白
IL23重組大鼠 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein
RTN4R Protein Mouse 重組小鼠 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
MME重組人 CD10 / Neprilysin / MME 蛋白 Protein
豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)試劑盒 ,英文名: MCP-4/CCL13 ELISA Kit
Human dopamine decarboxylase (DDC) ELISA Kit 人多巴胺脫羧酶(DDC)試劑盒
rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
CLIAKitforBetaOHBELISAKit大鼠β
細(xì)菌脫氧膽酸鹽瓊脂平板50個(gè)
Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit兔誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠脾臟單核細(xì)胞小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA 試劑盒
Human urokinase (UK) ELISA Kit 人(UK)試劑盒
HumanoligomericproteinELISAKit 人寡聚蛋白(oligomeric)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
GuineaPiglipidperoxlde,LPO試劑盒豚鼠過(guò)氧化脂質(zhì)/乳過(guò)氧化物酶(LPO)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母細(xì)胞高質(zhì)化線粒體分離試劑盒10次
MouseBromodeoxyuridine,BrdUELISAKit小鼠溴脫氧核苷尿(BrdU)試劑盒規(guī)格:96T/48T