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更新時間:2024-10-29
大鼠直腸平滑肌細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
直腸組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7170 |
細胞簡介:
大鼠直腸平滑肌分離自直腸組織;直腸為大腸的未段,位于小骨盆內。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結腸,沿骶骨和尾骨的前面下行,穿過盆膈,下端以而終。直腸上端的大小似結腸,其下端擴大成直腸壺腹,是糞便排出前的暫存部位,最下端變細接。直腸在盆腔內的位置與骶椎腹面關系密切,與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶,位于膀胱和生殖器官的背側。直腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈,來自髂內動脈的直腸中動脈和來自髂內動脈的直腸下動脈。平滑肌收縮是胃腸蠕動中基本的運動方式;腸炎時由于平滑肌特殊肌動蛋白的增加導致了平滑肌層的增厚。平滑肌肌動蛋白可能影響收縮力的產生,這進一步證明了炎癥時的腸平滑肌細胞具有可塑性。利用腸平滑肌細胞的培養(yǎng),可以幫助了解收縮、增殖和胃腸道結締組織對平滑肌細胞的反應。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠直腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的大鼠直腸平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
公司正在出售的產品:
兔子脫氫表雄酯(DHEA-S)試劑盒 96T/48T
兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒 96T/48T
兔子瘦素(LEP)試劑盒 96T/48T
兔子結合蛋白4(RBP-4)試劑盒 96T/48T
小鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat iact parathormone (i-PTH) ELISA Kit 大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)試劑盒
Humanproteiyrosinekinase,PTKELISAKit 人蛋白酪激酶(PTK/CD115)試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanBromodeoxyuridine,BrdU試劑盒人溴脫氧核苷尿(BrdU)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物組織線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒20次
HumanSomatostatin,SSELISAKit人(SS)試劑盒規(guī)格:96T/48T
卷曲螺旋結構域蛋白127抗體
腺嘌呤受體抗體
HA重組甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
phospho-ATF2(pSer490/pSer498 0.5mgphospho-ATF2(pSer490/pSer498) 0酸化活化復制因子2抗原
ALCAM重組人 ALCAM / CD166 蛋白 Protein
GAL Protein Human 重組人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 標簽)
CPB1 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白
phospho-ATF2(pSer490/pSer498 0.5mgphospho-ATF2(pSer490/pSer498) 0酸化活化復制因子2抗原
GAL Protein Human 重組人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 標簽)
HA重組甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
CPB1 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白
ALCAM重組人 ALCAM / CD166 蛋白 Protein
大鼠直腸平滑肌細胞大鼠整合素αM(ITGαM)試劑盒 ,英文名: ITGαM ELISA Kit
Mouse Clara cell protein (CC16) ELISA Kit 小鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)試劑盒
MouseIerleukin12,IL-12/P70ELISAKIT 小鼠白介素12(IL-12/P70)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit人糖化血紅蛋白A1c
無去垢劑裂解液用于物理裂解
ELISAKitTG大鼠甲狀腺球蛋白