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更新時(shí)間:2024-11-04
小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
骨骼肌組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7614 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠骨骼肌衛(wèi)星分離自四肢肌肉組織;骨骼肌又稱(chēng)橫紋肌,肌肉中的一種,約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞,肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌,橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官,有豐富的血管、淋巴分布,在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,不分支,有明顯橫紋,核很多,且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶(Ⅰ帶)及暗帶(A帶)。明帶染色較淺,而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱(chēng)H線。H線的中部有一M線。明帶中間,有一條較暗的線稱(chēng)為Z線。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段,叫做一個(gè)肌節(jié)。肌衛(wèi)星細(xì)胞指骨骼肌中除骨骼肌纖維(肌細(xì)胞)外的一種扁平、有突起的細(xì)胞。著于肌纖維(肌細(xì)胞)表面;當(dāng)肌纖維(肌細(xì)胞)受損后,肌衛(wèi)星細(xì)胞可增殖分化,參與肌纖維(肌細(xì)胞)的修復(fù),因此具有干細(xì)胞性質(zhì)。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨骼肌衛(wèi)星采用-膠原酶混合消化法結(jié)合多次差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨骼肌衛(wèi)星經(jīng)Desmin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含FBS、馬血清、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)試劑盒 96T/48T
小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)試劑盒 96T/48T
小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)試劑盒 96T/48T
小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)導(dǎo)向因子(Slit2)試劑盒 96T/48T
小鼠雙酪酸(dityrosine)試劑盒 96T/48T
Rat maix metalloproteinase 13 (MMP-13) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒
HumanAprotinin,APELISAKit 人(AP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
DuckIerleukin-4,IL-4試劑盒鴨白介素4(IL-4)試劑盒規(guī)格:96T/48T
藻類(lèi)菌脂質(zhì)綠色熒光染色試劑盒20次
MouseCytochrome-C,Cyt-CELISAKit小鼠(Cyt-C)試劑盒規(guī)格:96T/48T
β1,4-N乙酰半乳糖氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體
胰腺特異轉(zhuǎn)錄因子PTF1A抗體
NA重組甲型流感 H1N1 神經(jīng)酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性) Protein
phospho-AR/androgen receptor( p-Ser580 0.5mgphospho-AR/androgen receptor( p-Ser580)peptide 雄激素受體(多肽)
CSNK1G1重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
CLEC7A Protein Human 重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白
CPA2 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白
phospho-AR/androgen receptor( p-Ser580 0.5mgphospho-AR/androgen receptor( p-Ser580)peptide 雄激素受體(多肽)
CLEC7A Protein Human 重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白
NA重組甲型流感 H1N1 神經(jīng)酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性) Protein
CPA2 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白
CSNK1G1重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞大鼠關(guān)聯(lián)血漿蛋白A(PAPPA)試劑盒 ,英文名: PAPPA ELISA Kit
Mouse vascular endothelial cell growth factor (VEGF) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)試劑盒
RatAquaporin0,AQP-0ELISAKit 大鼠水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforGzms-AELISAKit大鼠顆粒酶A
細(xì)胞長(zhǎng)鏈烯脂酰水合酶(ENOYLCOAHYDRATASE)活性比色法定量試劑盒20次
RatUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)試劑盒規(guī)格:96T/48T
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