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產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:51
更新時間:2024-11-04
小鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
骨髓 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 圓形,樹突狀 | YS-01X7891 |
細胞簡介:
小鼠骨髓樹突狀分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的;樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導成的單核細胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導而成,多數(shù)呈懸浮生長, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態(tài)學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應(yīng)中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進而激活T淋巴細胞,誘導免疫應(yīng)答,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,不能激活T細胞的信號,可導致T細胞無能,從而誘導免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30%以下。
方法簡介:
實驗室分離的小鼠骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的小鼠骨髓樹突狀(成熟DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定,純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形,樹突狀
傳代特性:屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
小鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
轉(zhuǎn)氫酶-1試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣
轉(zhuǎn)氫酶-2試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣
α戊二酸脫氫酶(α-KGDH)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
檸檬酸(CA)含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白Ⅱ(IGFBP-Ⅱ)試劑盒
Human cyclic guanosine monophosphate (cGMP) ELISA Kit 人環(huán)0酸鳥苷(cGMP)試劑盒
RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 兔型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAP12(Mouseapelin12)ELISAKit小鼠apelin12
血清樣品樹脂法去內(nèi)毒素試劑盒20次
Porcineierleukin17,IL-17ELISAKit豬白介素17(IL-17)試劑盒
丙酮酸脫氫酶α1抗體
粘蛋白-1單克隆抗體
FCGR3A重組大鼠 CD16a / FCGR3A 蛋白 (His 標簽) Protein
histone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽 0.5mghistone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽
FABP1重組人 L-FABP / FABP1 蛋白 (His 標簽) Protein
BPIFA2 Protein Human 重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (His 標簽)
DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His 標簽)
histone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽 0.5mghistone H3-like protein 組蛋白H3樣蛋白多肽
BPIFA2 Protein Human 重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (His 標簽)
FCGR3A重組大鼠 CD16a / FCGR3A 蛋白 (His 標簽) Protein
DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His 標簽)
FABP1重組人 L-FABP / FABP1 蛋白 (His 標簽) Protein
小鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)試劑盒 ,英文名: Cr ELISA Kit
Rabbit ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 兔子α干擾素(IFN-α)試劑盒
伯氏疏(BB)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMMP-1(Rabbitmaixmetalloproteinase1)ELISAKit兔基質(zhì)金屬蛋白酶1
體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)活性比色法定量試劑盒20次
ELISAKitTn-Ⅰ犬肌鈣蛋白Ⅰ
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行
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